Techniques d'analyse des lipides
Séparation des lipides neutres en fonction de leur polarité
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Chromatographie sur couche mince
Dépôt des échantillons sur une
plaque de silice
Elution avec un mélange :
- d'un composé polaire qui imprègne la couche mince (phase stationnaire)
- d'un composé apolaire = phase mobile
Révélation par vapeur d'iode, colorant fluorescent,...
Les PL (Phospholipides) peuvent également être séparé par chromatographie sur couche mince selon leur polarité.
Etude des AG (Acides Gras) par chromatographie en phase gazeuse
Hydrolyse des TG, EC,... par saponification
(chauffage à 60°C avec KOH)
Extraction des AGL
Dérivation : méthylation pour les rendre volatiles
* Injecteur : T°C = 250°C
* Chromatographie de type gaz /
Liquide :
- phase stationnaire : microbilles de silice recouvertes d'un film
liquide
- phase mobile : azote, hélium
séparation des AG selon leur coefficient de partage
* Gradient de pression :
optimisation de la séparation en fonction du point d'ébullition
des AG
Détecteur à ionisation de flamme
Spectrométrie de masse
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Source d'ions : ionisation par impact électronique
M + Electrons M(+) + 2 électrons
Fragmentation de l'ion moléculaire M(+) -----> ions de masses variables
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Analyseur : secteur magnétique ou quadripôle
Séparation des ions en fonction de leur rapport masse / charge
Une particule de masse m et de charge e, acceleré par une tension U, entrant à la vitesse v dans un champ magnétique B perpendiculaire à v, décrit un arc de rayon r avec
2Um
r = √ (
------- )
B² z
Pour une radiofréquence données, seul les lions avec un rapport m/z particulier vont décrire une trajectoire leur permettant de frapper le détecteur.
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